1. 针对各种唾液gDNA提纯，昌美生物有什么方法？
    针对客户的各种需要，目前我们可用“一管法”、“小柱法”、“一管法结合小柱法”和“磁珠法”来提纯唾液DNA。根据客户需要提纯的唾液起始量、样品数量、手工或者自动化提纯、实验室具有的设备条件不同，我们都可以提供相应的适合用户的提纯方法和试剂盒。如有疑问，请与我们联系得到具体的帮助。

2. 在应用昌美生物“一管法”提纯时，发现有些提纯的DNA样品的OD260/OD280， OD260/OD230 比值低，怎么办？
    一般来说，OD值会受很多因素影响，比如是洗脱液pH、本身盐的浓度、样品的浓度、测量方法等，所以样品的纯度，也不能轻易用OD值的高低来决定，将样品用于下游实验得到的结果是更重要的指标。
（1）在我们的提纯步骤中，当裂解的样品，在加了我们的结合液（KB6结合液和异丙醇）后，如果温度低，盐和蛋白质杂物容易和DNA一起沉淀到结合管的管壁。在冬天，天气冷，温度低，如在这种低温下做提纯，可能会引起盐和蛋白质杂物的污染。建议在加了结合液后，在37℃培养箱或水浴锅中放2-3 分钟， 混合样本好后，放在室温的离心机离心（不要在4℃离心机进行离心），会减少盐和蛋白质的污染。
（2）如果在洗脱的DNA有明显的异物或者杂质，可以再加50 µl的洗脱液到洗脱的DNA样品中，充分混合，然后高速离心1分钟， 将上清液体转移到另一新管存放。
（3）根据我们的实验和客户反馈，即使样品的OD比值低些，但不影响下游的实验。同样可很好地用于下游实验，如PCR、Sequencing、RFLP、NGS等等。
（4）如果需要，可以使用我们的“小柱法”或“一管法结合小柱法”唾液DNA提纯试剂盒。

3. 有些样品在洗脱DNA后有胶质固形物存在，那是什么？怎么可以去掉？
    这些胶质固形物是来自粘稠痰液（viscous sputum），病人在收集唾液（saliva）时， 如果口腔咽喉有炎症，粘稠痰液会多些，使采集到唾液有很多粘稠痰液污染。粘稠痰液的糖蛋白含有大量蛋白质二硫键（Di-sulfated bond），使其粘度增加，成胶质状，而一般蛋白酶K的裂解，不能打断蛋白质二硫键，所以这些样品在洗脱DNA后有胶质固形物存在。但这些胶质固形物一般不影响下游的实验。
怎么去掉这些胶质固形物？
（1）在提纯时：在加蛋白酶K进行62°C裂解后，在裂解液中加二硫苏糖醇（dithiothreitol） 使其终浓度是 50 µg/ml（需自备1000 µg/ml dithiothreitol），然后将样本置于37°C温育20分钟，同时间歇混合样品使其充分混合好。 Dithiothreitol 可以裂解黏液的糖蛋白二硫键，从而降低样品的粘度，使痰液化，就好在提纯过程中，去掉痰的污染，并允许容易的处理和加工。 
（2）在提纯后：如果要去掉这些胶质固形物，在洗脱DNA样品里再加300 µl的洗脱液，充分震荡（Vortex）样品，然后，高速离心3 分钟，吸取上面的液体到一个新的结合管（不要下面的胶质固形物）。然后加等体积的结合液（KB6 + 异丙醇）（大约300 µl）。高速离心3 分钟，去掉液体， 然后，用 300 µl 的 Washing Buffer（WB2）洗一次， 离心，去掉液体， 加100 µl 洗脱液洗脱DNA。

4. 一管法和小柱法，各有那些特点：
    “一管法”提纯gDNA优点是方法简单，处理样品起始量多，可以处理1 ml、2 ml或者 4 ml的唾液混合液。得到的DNA产量高，但OD260/OD280较“小柱法”确实会偏低点，但一般不会影响下游实验。

    “小柱法”是用我们特别的硅膜方法，使用常规离心柱步骤，得到的纯度高，样品的起始量是300 µl（而Qiagen的小柱法的起始量是200 µl ），如果需要，还可以处理600 µl 的起始量。

5. 能否用更大体积的唾液来提取DNA？
    可以，如果需要，可以将4 ml唾液混合液全部用来进行DNA提纯。我们有针对各种唾液起始量的提纯方法，如4 ml、2 ml、1 ml、 600 µl  或者 300 µl 的唾液混合液。请与我们联系，您将得到最适合您的提纯方法。

6. 如果使用Qiagen的小柱法来提纯用昌美生物唾液收集瓶保存的唾液DNA，还需要使用Qiagen的裂解液吗？
    需要，因为Qiagen的裂解液的成分没有明确地告诉用户，其实，其裂解液的功能不仅使细胞裂解、还能使DNA结合到硅膜上面，在提纯用昌美生物唾液收集瓶保存的唾液DNA时，如果没有加Qiagen的裂解液，DNA就不能结合到硅膜上，DNA的产量就非常低。
    昌美生物的小柱法，是特别针对昌美生物唾液收集瓶保存的唾液DNA提纯开发的产品，方法比Qiagen的更简单，并且可以处理的唾液混合样品的起始量是300 µl，而Qiagen小柱法的起始量是200 µl。所以，使用昌美生物是小柱法，产量要提高50%以上。

7. 唾液DNA提纯后， 用什么方法检测DNA为好？

    当用UV Absorance方法来检测提纯的DNA，由于这种方法不能区分DNA和RNA，残留的RNA会增加OD值，过高估计DNA的产量，另外，降解的DNA片段也会增加OD值，所以我们建议用能和DNA特异结合的荧光染料（fluorescent dye）法来检测提纯的DNA产量。

    另外，Nanodrop 在测 10 ng/µl  以下的DNA样品时，由于机器本身的灵敏度的限制，所测值是不可靠的。所以，当DNA浓度低于10 ng/µl  时，用Nanodrop测得的 OD260/OD280值以及 OD260/OD230值都是不可靠的。在这种情况下，不要用OD值来推断样品中盐浓度的高低。

8. 为什么唾液DNA的含量各人不一样？一般来讲，提纯的唾液DNA量有多少？
    唾液中DNA的含量，会因人而异，变化比较大。一般来讲，从一个健康人采集2 ml唾液，可以获得15 µg- 200 µg的gDNA。
其它影响DNA产量的因素:
（1）唾液采集方法；
（2）唾液gDNA提纯方法的效率高低；
（3）DNA提纯后的DNA定量检测方法。